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潘雨来:家兔人工授精技术规范化操作及注意事项
--江苏省畜牧总站 研究员

2014-06-05字号:[ ]

  今天,很高兴在济南跟养兔界各位同仁就人工授精技术做一个交流。我汇报的题目为“家兔人工授精技术规范化操作及注意事项”。这项技术在上个世纪80年代就传入中国在兔业生产中应用,但直到今天总体推广覆盖面还不是很广。如规模化发展、产品研发等大的环境影响大家都知道,另操作中一些细小环节的技术处理或者做得不到位,也事关人工授精技术是否成功,所以我讲操作的注意事项可能会更多一点。

   一、人工授精技术发展历程

    人工授精广义上讲,使用器械采集公畜的精液,再用器械把经过检查和处理后的精液输入到母畜的生殖道内,代替公母畜自然交配而繁殖后代的一种繁殖技术。

20世纪40年代起,人工授精技术蓬勃发展,成为家畜品种改良的重要手段,到了上世纪90年代在奶牛、生猪、家禽等畜种繁殖中已普遍应用。

   二、家兔人工授精技术应用现状

  1、国外。在养兔发达的法国、德国、匈牙利等国家人工授精技术已经普遍使用,比如说德国在上个世纪80年代就是当时国际上此技术研究应用最先进的国家,现在的法国是人工授精技术使用范围、技术水平最高的国家,其在全国建有多个种公兔精液站,大多数农户不再饲养种公兔,而由精液站实行统一供精配种。

  人工授精器械国外都是标准化生产。2006年我到法国考察时,它们有专门生产家兔人工授精器械的企业,从采精、输精到冷冻精液制作所有器械设备都有专门的生产线。如图为一套法国人工授精器具,最左边这张图有连续输精枪、输精管和采器。法国根据使用精液的形式,采用不同的输精管输精。我手中所拿两根法国进口的输精管,直的这根在国内是比较常见的,在法国这种输精管主要用于冷冻精液的输精,其管中有一根固定套,经过解冻的冷冻精液细管放入其中,这个套子用于固定细管以防止进入母兔阴道。头端带有弯曲状的输精管,主要用于鲜精的输精。右上角是法国的采精器,这个是外壳,里面有内胆,用胶把两头粘住,有一个口用于注水。法国不像国内一个采精器用到底,比如说今天要采取50只公兔的精液,把50只采精器全部制作好放入恒温箱保温,采一个公兔用一个采精器,不在现场制作和频繁更换注水,这样有利于防疫卫生,又提高了采精效率,缩短精液使用时的等待时间。国外还有一种电加热采精器,中间有一个电加热片,将温度设置好后通过电加热进行保温,这项技术普及率还不是太高,因为它移动不是太方便。在国外主要是规模化商品经营用,生产中一般都是使用连续输精管。

  2、国内。一些大型场、饲养技术水平较高的地区正在使用。比如说青岛康大在这项技术的推广,对全国也做出了很大的贡献,它直接把法国的技术在中国进行了应用推广。但总体应用范围较小,推广程度不高。具体表现为:国内在器具的标准化、精确化明显落后于国外。比如,国内一些企业使用的采精器形式各样,基本上都是自己用一些土办法制作而成,有用PCR管改造的,有仿造法国的。输精枪也是千姿百态,有用羊的授精管将前端用火烧断改制而成的,有用试验滴管的,在一些场里面也有用连续注射器的。操作规范性不够,缺少统一标准。山东由李福昌教授率先在全国制定了人工授精技术操作规程,这具有划时代的意义,因为国内一直没有人工授精技术标准,山东是第一个出台省级标准的,江苏省在2011年也制定了,现在正等待发布。由中国畜牧业协会牵头制定的行业标准,今年也已完成了送审稿。另外,配套技术及激素、稀释液等产品研发跟不上人工授精技术的发展,这也制约着人工授精技术的发展。

  三、家兔人工授精必备条件

    各个场根据自己的情况,不一定做多大规模,一要有一个人工授精操作室,几个平方就够了,只要适合器械消毒、精液检查和稀释就可。二要有一些消毒设备,采精的集精瓶可以用消毒锅,塑料的输精管制品或者玻璃的,可以用微波炉或消毒柜。三是精液检查使用的显微镜。四是用于保存激素、稀释液的冰箱。

    四、采精前的准备

  一要选择优秀的种公兔。俗话说:母兔好、好一窝;公兔好,好一坡。生产中一定要重视种公兔的选择,需采用适龄的、易于采精且精液品质优良的公兔。如果是首次使用,我们要进行调教。

  二是选择适宜的台兔。台兔是用以诱导公兔射精。生产中一天需采几十只的时候,你要用手去抓着,如果台兔过重,一天下来,操作者的手腕会很累,因此一般选择体重偏轻、淘汰的母兔,最好不要用公兔。有些企业用公兔,两个公兔异性相斥,可能会打架导致公兔的意外损伤,这是一种错误做法。另外,采精对台兔的损伤很大,所以不建议用正在繁殖用的母兔,而用淘汰的母兔较为适宜。

    三是洁净的采精和输精装置。采精器有两部分组成,一个是假阴道,一个是集精瓶。假阴道有内胆和外壳组成,内胎为塑胶引流管;集精瓶为盛装精液的容器。输精装置一般包括输精管和输精枪。

    四是稀释液。生产中常用的稀释液有5%的葡萄糖、0.9%的生理盐水或商品用稀释粉。一般5%的葡萄糖作稀释液相对比较好,它可以为精子提供一些必要的养分。随着规模化、商品化、专业化生产,商品稀释粉也已出现,在猪、牛、羊的人工授精中已广泛使用,但是兔精液专用稀释粉不多,但我们可以使用猪、羊稀释粉进行稀释,我们做过很多试验,效果还可以,比传统的葡萄糖或生理盐水效果好。

  五是激素,主要是促排卵激素,如果做同期发情,需孕马血清。大家都知道兔子是刺激排卵动物,如果不注射促排卵激素,兔子成熟的卵细胞无法成功排出,故兔子很难受孕或者受孕率非常低。生产中促排卵激素一般用生理盐水稀释,且一定要现配现用,因为激素超过一定时间,它的使用效果将变得非常差。

  其它还需准备用于假阴道消毒和温度调节的开水。

    这中间我们需注意以下几个事项:

    公兔首次需调教,将成年发情的母兔放入待调教的公兔笼内,让公兔追逐母兔2~3圏,随后用一只手抓住母兔双耳及颈部皮肤固定母兔,诱导公兔爬跨,当公兔爬跨成功即将发生交配时,用另一只手迅速将公兔推下,以此反复34次为宜,最后一次公兔爬跨完成后立即使用采精器进行精液采集训练。其中注意不要长时间让公兔追逐母兔追,以免消耗公兔大量体力。

    在采精之前要把稀释液从冰箱拿出来,放入水浴锅或者有空调的环境下,调至与精液温度相近。特别是冬天,因为稀释液的温度比较低,如直接稀释精液,会对精子造成很大损伤。

  商品稀释液营养物质以及酸碱平衡都根据精子的需求配置好了,但是在生产过程中我们发现,部分使用者会犯一个小小的错误,即用生理盐水或者葡萄糖去稀释,这会导致它的酸碱失衡和盐分失调,造成精子的损伤。所以,大家使用商品稀释粉时最好用二次蒸馏水,市场上能买到。如果确实买不到,还有一种就是纯净水,也就是用我们平常喝的纯净水进行稀释。

  激素激素现配现用,超过4小时禁用。上午如没有用掉,下午需重新配一支,浪费一支不要舍不得。采精的器械使用前需经严格消毒。

    五、采精器制作

  传统的采精器需灌注温水以调节采精器的温度,这个大家都比较清楚。组装是通过把内胆两头套叠在外壳上,然后把温水通过外壳上的小孔用漏斗注入到假阴道的夹层中,这个时候尽量把里面的空气排干,让水注入的比较多一点。这里面注水的温度是关键,一般注入的水在50℃~55℃,温度过高易烫伤公兔阴茎,过低也采不出精液。

  无水假阴道组装,等一会儿有一个视频会演示给大家看。先将内胎从外壳中央横穿,内胎两头外露部分各保持约2~3cm长度,先将外壳粗端一边内胎反套固定,接着将外壳细端一边内胎拉紧并旋转2~3圈左右,内胎中央呈漏斗状、中间为针眼样大小空隙时将内胎反套固定。组装完毕后,其本身有一定的压力,但是压力不够,采精的压力是通过集精瓶来调制的,将集精瓶从细端插入,并通过调节插入的深度调控压力,并根据需要随时调整。它的保温主要是边上放一个盆,里面加注热水,每采精一次之前,把假阴道放入开水中,一是作为浸泡消毒处理,二是进行保温。在公兔爬跨采精之前拿出来甩干,然后再进行使用。

    下面我以自己发明的采精器进行讲解。采精器的制作很简单,制作内胆要松紧适宜,保持压力;内胆过松很难采到精液;过紧,精液则无法流入集精瓶。

    六、采精

    步骤一:采精是把假阴道放入开水里面进行浸泡,首次浸泡,特别是冬天时间要稍微长一点,大概要泡七八分钟,让它温度升上来。以后只要在上只公兔采精完成至下一只公兔采精时浸泡时间就足够了。采精时,假阴道内壁的温度保持在42度左右是最适宜的。过高会把公兔的阴茎损害,射精量也不会太高,长期以来影响公兔精液品质;如果过低,公兔很难射精,但总想爬跨,如此体力消耗过大,这只公兔后面就很难采到精液了。

  步骤二:将台兔放入公兔笼内,操作者左手抓住台兔的头部及耳根并固定,右手将假阴道从温水中取出并用力把水甩干,因为内胆是塑胶制品,水一甩就能甩干。然后将集精瓶从假阴道的小头插入。采精之前,左手固定母兔耳朵和头部的时候,集精瓶放在左手的虎口就可以了,待公兔将射精需组装时,右手将假阴道直接往上一插就可以了,很简单的。

  步骤三:当公兔爬跨时,一手紧抓台兔双耳及颈部皮肤使其头部朝向操作者,压低台兔头部,另一手握组装好的采精器置于台兔腹下两后腿之间,顺势抬高台兔臀部,使采精器无集精瓶一端与台兔外阴部相平或略超出一些,约与平行线呈30度,同时根据阴茎伸出的方向和角度及时调整采精器位置,以迎合公兔阴茎插入。

  步骤四:公兔射精后,一定要注意,不要急于把集精瓶拿出来,这个时候还有部分精液没有流入集精瓶,这时需把它竖起来,稍等片刻让精液全部流入之后,将集精瓶放入保温设备中。

    步骤五:采精结束后,将采精器再放入开水中进行洗刷、消毒保温,以备下一只公兔使用。

    七、精液品质的检查

    主要有两个方法:

    一是肉眼观察法。肉眼一般看精液的的量和色,精液量一般在0.5-2毫升之间,色泽为乳白色或灰白色。如果精液为红色、黄色或有异味,说明这个公兔有相应的生殖道疾病或者其他的毛病,这份精液一定要弃用。如精液中含有附性腺分泌物,需用镊子或玻璃棒将其剔除后再进行计量和镜检。

  二是镜检法,也就是通过显微镜检查。检查方法:用玻璃棒蘸取原精液微量,滴在载玻片上,盖上盖玻片,这个时候一定要注意不能让盖玻片和载玻片之间有大量的气泡,以免影响检查。然后再在160倍或者400倍的显微镜下检查。一般检查前,需将盖玻片和载玻片进行预热到30度左右,特别是冬天玻璃的温度很低,对精液的刺激也是很大的。检查的时候,让精液与载玻片、盖玻片的温度相差不要超过5度。

  检查的主要内容为精子的活力和密度,活力为精子呈直线运动的数量,密度主要看视野中精子的数量。生产中一般为定性判断,一般++++++、+。3个+就是整个视野看着都为直线运动的精子,2个+是精子和精子之间大概有一个精子的距离。密度2个+以上、精子的活力0.6以上才可以用于输精。

    八、精液稀释

  通过检查确定倍数进行稀释,稀释总量按0.5mL/只兔的输精剂量的倍数计算。稀释倍数理论上可以很高,但是生产中一般密度“+++”的精液按其自身量的8 倍进行稀释,密度“++”的精液按其自身量的5倍进行稀释。稀释倍数不要过高,因为影响母兔受孕的各种因素很多,为此需要保证足够的有效精子数量。

  稀释中需注意:一定要以精液温度为准,将稀释液温度调至与精液温度相近;稀释的时候动作要快,剂量要准,不要在那里磨蹭,耽误很长时间,特别是冬天时间过长会影响到精子的活力;稀释精液时,需将吸取稀释液的针管沿瓶壁缓慢推射入瓶中,边推边轻轻旋转,以让稀释液和精液混合;最后还需抽查两瓶稀释过的精液进行复查,以确保稀释后的精液质量可行。

    九、输精

  步骤一:从稀释到输精还有一个时间过程,为防止精液出现分层现象,避免吸取的精液中精子含量不同,影响配种效果,每瓶精液使用前需先轻轻旋转,使精子均匀分布,但千万不要用力去甩和摇。

  步骤二:输精管中先吸取约0.5mL空气,再将输精管贴着瓶壁插入倾斜的集精瓶中按规定的剂量轻轻吸取精液,每只母兔0.5mL这个0.5 mL是有目的的,主要是为了在输入精液的时候,最后通过空气将所有的精液输入到母兔的阴道,避免每个输精管都有部分精液残留,造成浪费。

  大家生产中用到的可能是连续输精管,连续输精管主要用于商品生产是非常方便的,因为它把所有的精液采集进行混合,装入100 mL瓶中,这样可以避免中间反复吸取,但是在种兔生产中建议用单管输精,每次输精前先吸取0.5毫升的空气。

  步骤三:操作者一只手抓住母兔尾根及臀部皮肤倒提母兔,使后肢离地,如果四肢在平台上,母兔会蹬,会跑,可能会造成意外的损伤。另一只手拿纱布或者棉花求清洁母兔外阴部,并顺势用拇指向下按压阴门至裂开外翻后松开,然后用拇指、食指和中指抓住输精管末端与输精枪连接处,有些人为了方便先抓住前端,再慢慢往前推,觉得这样省力,其实操作中整个手已将输精管污染,可能会让一些细菌、病毒进入到母兔的生殖道器里,诱发疾病发生。兔子的体型有大小,品种也有不同,根据实际情况决定输入深度,生产中一般的输精管的深度为7-12公分,如果这个时候遇到有一些阻力,一定要把它往回抽,再调整姿势试着慢慢地输入。这中间是什么原因,等会儿再讲。

  步骤三:输精结束后,将母兔倒提轻轻拍打,使精液全部进入体内,这时候根据厂家推荐的剂量使用再肌肉注射促排3号。如遇刚把母兔放下,母兔就撒尿了,这个时候最好再补输一次。

  本环节操作中需注意几个事项:避免输精管污染。输精动作要轻柔。如果输精管无法顺利插入,特别是母兔首次配种的时候,母兔的阴道很紧,这个时候如果用力过猛可能会损伤母兔的阴道壁。此时需调整母兔姿势,并轻轻抚摸它的背部,以缓解母兔紧张程度,稍等片刻后重新抓起,倒提再次输入。输精管插入到阴道中时候,不要急于去输精,此时回抽一点点再输入,让输精管不要顶着阴道壁,以免精子的冲击造成损伤。另外,吸取精液适量,防止进入输精枪。

    十、影响人工授精受孕率的因素

    精液的品质、母畜健康状况、人工授精操作熟练程度和配种时机。如果母兔体内没有成熟的卵细胞,你怎么输精它都不会受孕的。

    十一、注意事项

  一是刚才的所有环节要严格执行消毒制度,输精管做到一兔一用。我在一个场里看到一个情况,就用几个输精管输精,最后所有的母兔都有生殖道炎症,几百只母兔全部淘汰。

  二是在输精的过程中,精液从采精到输精完毕,不得直接接触有害物质、有害气体或者冷的生水,生水对精子的损伤也是很大的,更不要把精液置于阳光下。精液采集好,上面一定要把一个纱布或者保温的东西把它罩住。

  三是人工授精过程中,严禁吸烟,严禁酒后输精。酒里面含有酒精,酒精对精子具有杀伤力。也不要涂香擦粉、擦油,以免伤害精子。

  四是如果发现有生殖道疾病的母兔,要及时淘汰和治疗,不要给它进行配种。

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